Імуногістохімічний аналіз пейєрових бляшок тонкої кишки білих щурів у нормі

Abstract

Ключовою структурою пейєрових бляшок, в якій здійснюється ініціація імунних реакцій, є покриваючий їх апікальні відділи, поляризований моношар різних за спеціалізацією типів ентероцитів, серед яких виділяються в основному абсорбційні, келихоподібні і так звані М-клітини. Метою дослідження було проведення імуногістохімічного аналізу і з’ясування зон переважної локалізації основних типів імунокомпетентних клітин пейєрових бляшок тонкої кишки білих щурів у нормі. Об’єкт і методи дослідження. В експерименті задіяні 30 білих щурів-самців репродуктивного віку. Для дослідження використані ділянки тонкої кишки, в яких знаходилися пейєрові бляшки. Імуногістохімічну оцінку клітинного складу і імунних клітинних реакцій в пейєрових бляшках, їх лімфоїдних вузликах і лімфоїдно- асоційованому епітелії виявляли за експресією Т- і В-клітинних кластерів диференціювання (CD3, CD79), маркера плазматичних клітин (CD38), маркера макрофагів (CD68(КР1)), маркера дендритних клітин (CD23), маркера епітеліальних клітин ПАН-цитокератину (Cytokeratin PAN AE1/AE3). Використовувалися первинні моноклональні антитіла (МКАТ) фірми Thermo scientific (Німеччина), Rady-to-Use. Результати підраховували за допомогою окулярної сітки Автанділова у 10 довільно вибраних полях зору при збільшенні х400. Комплекс морфологічних досліджень проводився на мікроскопі Primo Star (Carl Zeiss) з використанням програми AxioCam (ERc 5s). Результати роботи. У результаті імуногістохімічного аналізу пейєрових бляшок тонкої кишки інтактних тварин отримані узагальнені дані про кількісне співвідношення в них між основними популяціями імунокомпетентних клітин. Висновки. Основну масу імунокомпетентних клітин склали В-лімфоцити (близько 47%) і Т-лімфоцити (близько 35%), тоді як на долю плазмоцитів, макрофагів і дендритних клітин доводилося приблизно по 5% на кожні з них. Але при цьому не вдалося отримати не лише даних про кількість в лімфоїдно-асоційованому епітелії пейєрових бляшок М-клітин, але навіть виявилося безрезультатним прагнення до їх чіткішої елективної ідентифікації.

Ключевой структурой пейеровых бляшек, в которой осуществляется инициация иммунных реакций, является, покрывающий их апикальные отделы, поляризованный монослой разных по специализации типов энтероцитов, среди которых выделяются в основном абсорбционные, бокаловидные и так называемые М-клетки. Целью исследования было проведение иммуногистохимического анализа и выяснения зон преимущественной локализации основных типов иммунокомпетентных клеток пейеровых бляшек тонкой кишки белых крыс в норме. Объект и методы исследования. В эксперименте задействовано 30 белых крыс-самцов репродуктивного возраста. Для исследования использованы участки тонкой кишки, в которых находились пейеровы бляшки. Иммуногистохимическую оценку клеточного состава и иммунных клеточных реакций в пейеровых бляшках, их лимфоидных узелках и лимфоидно-ассоциированном эпителии выявляли по экспрессии Т- и В-клеточных кластеров дифференцировки (CD3, CD79), маркера плазматических клеток (CD38), маркера макрофагов (CD68 (КР1)), маркера дендритных клеток (CD23), маркера эпителиальных клеток ПАН-цитокератина (Cytokeratin PAN AE1/AE3). Использовались первичные моноклональные антитела (МКАТ) фирмы Thermo scientific (Германия), Rady-to-Use. Результаты подсчитывали с помощью окулярной сетки Автандилова в 10 произвольно выбранных полях зрения при увеличении х400. Комплекс морфологических исследований проводился на микроскопе Primo Star (Carl Zeiss) с использованием программы AxioCam (ERc 5s). Результаты работы. В итоге иммуногистохимического анализа пейеровых бляшек тонкой кишки интактных животных получены обобщенные данные о количественном соотношении в них между основными популяциями иммунокомпетентных клеток. Выводы. Основную массу иммунокомпетентных клеток составили В-лимфоциты (около 47%) и Т-лимфоциты (около 35%), тогда как на долю плазмацитов, макрофагов и дендритных клеток приходилось примерно по 5% на каждые из них. Но при этом не удалось получить не только данных о количестве в лимфоидно-ассоциированном эпителии пейеровых бляшек М-клеток, но даже оказалось безрезультатным стремление к их более четкой элективной идентификации.

Peyer’s patches are the integration of a number of individual lymphoid nodules, each of which usually distinguished zones with their predominant localization in the T- and B-lymphocytes. In addition, their key structure in which the initiation of immune reactions is carried out is their apical sections, a polarized monolayer of different types of enterocytes, among which mainly absorption, goblet and so-called M-cells. The aim of this study was to carry out an immunohistochemical analysis and clarify areas of primary localization of the main types of immunocompetent cells of Peyer’s patches of the albino rats small intestine is normal. Object and methods of research. 30 mature albino male rats weighted 200,0±20,0 g were involved into the study. For the study used portions of the small intestine, which are the Peyer’s patches. To study the immunohistochemical (IHC) features of Peyer’s patches, the material was fixed with 10% neutral formalin for 24 h, embedded in paraffin, sections were prepared with a thickness of 4 μm, which were applied to highly adhesive Super Frost glasses and dried at a temperature of 37°C for 18 hours. The unmasking heat treatment was performed by the method of boiling sections in citrate buffer (pH 6.0). For visualize primary antibody detection system used Ultra Vision Quanto Detection Systems HRP Polymer (Thermo scientific). It was used as the chromogen DAB (diaminobenzidine). Assessment of cell composition and immune cell responses in Peyer’s patches, their lymphoid nodules, and lymphoid-associated epithelium was detected by expression of T- and B-cell differentiation clusters (CD3, CD79), plasma cell marker (CD38), macrophage marker (CD68 (KP1)), a dendritic cell marker (CD23), an epithelial cell marker of PAN-cytokeratin (Cytokeratin PAN AE1/AE3). Used primary monoclonal antibodies (moAb) firm Thermo scientific (Germany), Ready-to-Use. Results were calculated using the eyepiece grid Avtandilov a 10 randomly selected fields at X400 magnification. Evaluation IHC label was determined by the distribution. The extent of the label into account for the percentage of positively stained in brown color of the membranes (and the cytoplasm – for CD68) cells by the total number of cells in the visual field. The complex morphological studies carried out on microscope Primo Star (Carl Zeiss) using a AxioCam program (ERc 5s). Results of work. As a result, immunohistochemistry Peyer’s patches of the small intestine intact animals received generalized data on the quantitative ratio therein between main populations of immunocompetent cells. Conclusions. The bulk of immunocompetent cells were B-lymphocytes (about 47%) and T-lymphocytes (about 35%), while plasmacytes, macrophages and dendritic cells accounted for about 5% for each of them. But it was not possible to obtain not only information about the number of lymphoid-associated epithelium of the Peyer’s patch M cells, but even proved fruitless pursuit of their elective clearer identification.