Чутливість різних представників роду candida до антимікотиків

Abstract

Представники Candida.spp. володіють різною чутливістю до азолових сполук, які широко використовують в терапії кандидозів. За рахунок своєї стійкості до даних сполук C.glabrata залишається і організмі і, більш того, здатна розмножуватися та збільшувати свою популяцію. Це досить часто стає причиною розвитку нозокоміальних інфекцій. Метою даної роботи було дослідження чутливості до протигрибкових препаратів клінічних штамів С. аlbicans і C.glabrata,виділених від пацієнтів хірургічних відділень. Матеріали та методи. Об’єктами дослідження стали 5 клінічних штамів C. albicans та 5 C. glabrata, отриманих від хворих відділень торакальної та судинної хірургії Полтавської обласної клінічної лікарні ім. В.М. Скліфосовського. З метою визначення чутливості досліджуваних клінічних ізолятів до антимікотиків використовували метод подвійних серійних розведень у рідкому поживному середовищі за стандартною методикою, відповідно до наказу МОЗ України №167 від 05.04.2007 р. «Про затвердження методичних вказівок «Визначення чутливості мікроорганізмів до антибактеріальних препаратів» [7]. Мінімальну інгібуючу концентрацію (МІК) визначали за найменшою концентрацією протигрибкового препарату, що була здатна пригнічувати видимий ріст досліджуваної культури мікроорганізму, наявність якого оцінювали шляхом огляду пробірки у прохідному світлі, порівнюючи з «негативним» контролем. Для контролю якості визначення чутливості мікроорганізмів до протигрибкових препаратів використовували референтний штам Candida albicans ССМ 885 з музею живих культур кафедри мікробіології, вірусології та імунології УМСА. Тестування контрольного штаму проводили відповідно до описаного вище методу паралельно з дослідженням клінічних ізолятів. Результати визначення чутливості (МІК) контрольного штаму співставляли з відповідними показниками його паспортної характеристики. При їх відповідності умови постановки експерименту вважали стандартними, а результати визначення чутливості клінічних ізолятів, отримані в цих умовах, вважали достовірними. Для визначення чутливості представників роду Candida spp. використовували природні протигрибкові засоби полієнового ряду (амфотерицин В) та синтетичні препарати групи азолів (флуконазол, ітраконазол) та похідних піримідину (флуцитозин). Статистичний аналіз отриманих результатів здійснювали за допомогою стандартного пакету програми “Microsoft Excel 2010”. Наявність відмінностей між досліджуваними показниками оцінювали за t-критерієм Стьюдента. Результати та їх обговорення. За результатами досліджень, синтетичний протигрибковий препарат флуцитозин володіє найнижчою фунгістатичною дією щодо представників Candida spp. Присутність флуцитозину пригнічувала розмноження еталонного штаму C. albicans у концентрації 2 мкг/мл. Поряд з цим, клінічні штами цього роду дріджоподібних грибів були однаково чутливими до флуцитозину з МІК 3,2±0,96 мк/мл. Це вказує на низьку ефективність даного антимікотика щодо Candida spp.

Representatives of Candida.spp. demonstrate different susceptibility to azole compounds, which are widely used in the treatment of candidiasis. Due to the resistance to these compounds, C. glabrata remains in the body and, moreover, is able to multiply and increase its population. It quite often causes the development of nosocomial infections. The purpose of this study was to investigate the susceptibility of clinical strains of C. albicans and C. glabrata isolated from surgical patients to antifungal drugs. Materials and methods. We studied 5 clinical strains of C. albicans and 5 clinical strains of C. glabrata, taken from the patients of Thoracic and Vascular Surgery Units, V.M. Sklifosovskiy Poltava Regional Clinical Hospital. In order to assess the susceptibility of the studied clinical isolates to antimycotics, the method of two-fold serial dilutions (macrodilution) in liquid nutrient medium was used as the standard procedure according to the order of the Ministry of Public Health of Ukraine No. 167 dated April 05, 2007, on Approval of Guidelines “Assessment of Microbial Susceptibility to Antibacterial Drugs”. MIC was determined by the lowest concentration of the antifungal drug, which was able to suppress the visible growth of the studied microorganism culture. The presence of growth was assessed by inspecting the tubes in transmitted light compared to the “negative” control. To control the quality of evaluating susceptibility of microorganisms to antifungals, we used the reference strain Candida albicans CCM 885 taken from the Museum of Living Cultures of the Department of Microbiology, Virology and Immunology, UMSA. Testing of the control strain was carried out in accordance with the method described above in parallel with the study of clinical isolates. The findings obtained by evaluating the susceptibility (MIC) of the control strain were compared with the relevant parameters of its passport characteristics. If they match, the conditions of the experiment were considered as standard, and the results of evaluating sensitivity of clinical isolates obtained under these conditions were considered as reliable. To identify susceptibility of the genus Candida spp., natural anti-fungal agents of the polyene series (amphotericin B) and synthetic drugs of the azoles group (fluconazole, itraconazole) and pyrimidine derivatives (flucytosine) were used. Statistical analysis of the findings obtained was carried out using the standard software package "Microsoft Excel 2010". The presence of differences between the studied parameters was assessed by Student's ttest. Results and discussion. The study has demonstrated that the synthetic antifungal, flucytosine, has a low fungistatic effect on Candida spp. The presence of flucytosine inhibits the reproduction of the reference C. albicans strain at a concentration of 2 μg / ml. Along with it, clinical strains of yeast-like fungi of this genus were equally sensitive to flucytosine with a MIC of 3.2 ± 0.96 μ / ml. This indicates a low efficacy of this antimycotic for Candida spp.

Представители Candida.spp. обладают различной чувствительностью к азоловым соединениям, которые широко используют в терапии кандидозов. За счет своей устойчивости к данным соединениям C.glabrata остается и организме и, более того, способна размножаться и увеличивать свою популяцию. Это довольно часто становится причиной развития нозокомиальных инфекций. Целью данной работы было исследование чувствительности к противогрибковым препаратам клинических штаммов С. аlbicans и C.glabrata, выделенных от пациентов хирургических отделений. Материалы и методы. Объектами исследования стали 5 клинических штаммов C. albicans и 5 C. glabrata, полученных от больных отделений торакальной и сосудистой хирургии Полтавской областной клинической больницы им. В.М. Склифосовского. С целью определения чувствительности исследуемых клинических изолятов к антимикотикам использовали метод двойных серийных разведений в жидкой питательной среде по стандартной методике, согласно приказу МОЗ Украины №167 от 05.04.2007 г. «Об утверждении методических указаний «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам». МПК (МИК) определяли по наименьшей концентрации противогрибкового препарата, которая была способна подавлять видимый рост исследуемой культуры микроорганизмов. Наличие роста оценивали путем осмотра пробирки в проходящем свете, по сравнению с «негативным» контролем. Для контроля качества определения чувствительности микроорганизмов к противогрибковым препаратам использовали референтный штамм Candida albicans ССМ 885 из музея живых культур кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии УМСА. Тестирование контрольного штамма проводили в соответствии с описанным выше методом параллельно с исследованием клинических изолятов. Результаты определения чувствительности (МИК) контрольного штамма сопоставляли с соответствующими показателями его паспортной характеристики. При их соответствии условия постановки эксперимента считали стандартными, а результаты определения чувствительности клинических изолятов, полученные в этих условиях, считали достоверными. Для определения чувствительности представителей рода Candida spp. использовали природные противогрибковые средства полиенового ряда (амфотерицин В) и синтетические препараты группы азолов (флуконазол, итраконазол) и производные пиримидина (флуцитозина). Статистический анализ полученных результатов осуществляли с помощью стандартного пакета программы "Microsoft Excel 2010". Наличие различий между исследуемыми показателями оценивали по t-критерию Стьюдента. Результаты и их обсуждение. По результатам исследований синтетический противогрибковый препарат флуцитозина обладает низким фунгистатическим действием в отношении представителей Candida spp. Присутствие флуцитозина подавляло размножение эталонного штамма C. albicans в концентрации 2 мкг / мл. Наряду с этим, клинические штаммы этого рода дрожжеподобных грибов были одинаково чувствительны к флуцитозину с МИК 3,2 ± 0,96 мк / мл. Это указывает на низкую эффективность данного антимикотика для Candida spp.