Структурно-функціональні показники кріоконсервованої плаценти і вплив її трансплантації на морфофункціональний стан ряду внутрішніх органів

Abstract

Дисертація присвячена вивченню впливу гіпотермії та низьких температур на тканину плаценти та впливу трансплантації плаценти на морфофункціогенез органів. Установлені оптимальні технології кріоконсервування плаценти та довгострокового її зберігання. Уперше встановлено, що підшкірна трансплантація нативної і кріоконсервованої плаценти супроводжується вираженим стимулюючим впливом на різні органи і системи, що пояснюється наявністю в її тканині великої кількості фетальних білків та біологічно активних речовин. У групі тварин при трансплантації кріоконсервованої плаценти реакції регенераторного типу більш виражені, але коротші, ніж у групі тварин при трансплантації нативної плаценти, хоча в обох випадках вони знаходяться в межах фізіологічної регенерації. Проведене комплексне порівняльне дослідження деяких показників периферичної крові, а також морфологічних змін у вогнищі запалення у тварин з експериментальним асептичним запаленням при трансплантації біологічно активних речовин плацентарного походження та експериментально обґрунтована доцільність їх застосування.

В работе определены оптимальные условия гипотермического и низкотемпературного хранения, оптимизированный процесс криоконсервирования плаценты. Гипо термическое хранение фрагментов плаценты при t° 4°С сроком двое сугок (первый подготовительный этап при проведении криоконсервирования), а также применение ди.метилсульфоксида в качестве криопротектора при криоконсервировании не приводит к существенному нарушению активности дегидрогеназ в тканях плаценты человека. Наблюдается лишь небольшое нарушение процесса гликолиза и перекисного окисления липидов. В процессе замораживания и размораживания активируются ферменты ограниченного протеолиза. Эти протеазы способны частично расщеплять белок, в том числе и гіролактин, что может быть обусловлено разрывом кристаллами льда лизосом. Отмечается достоверное, но не существенное снижение концентрации ряда гормонов (пролактин. тестостерон. кортизол) в ткани плаценты после процедуры криоконсервирования. При этом в исследованных образцах плаценты, которые подвергнуты хранению при разных температурах, и вариантах консервации не наблюдается достоверных изменений концентрации белка. Наибольшее достоверное усиление свободнорадикального перекисного окисления в тканях плаценты происходило при хранении ее і сутки при 4°С (2- я серия) и I сутки - при -196°С, а затем 1 год - при -20°С (5-я серия). Относительное содержание первичных, вторичных и конечных продуктов перекисного окисления липидов характеризуется близкими к контролю значениями в случае использования режима сохранения плаценты 1 сутки при -20°С или 1 сутки при -20°С с последующим погружением в жидкий азот на 1 год (3-4 серии). Это свидетельствует о том, что условия в 3 и 4 сериях являются оптимальными но сравнению с условиями 2 и 5 серий. На трансплантацию нативной и криоконсервированной плаценты организм отвечает активной реакцией, которая проявляется в ранние сроки наблюдения (7-14 суток) за счет введения с тканью плаценты большого количества биологически активных веществ, гормонов и других факторов, которые содержатся в большой концентрации в ткани плаценты. В поздние сроки исследования (30--60 суток) в органах преобладают более «спокойные физиологические процессы». Установлено, что криоконсервированная плацента вызывает более выраженную соответствующую реакцию, чем нативная. В печени экспериментальных животных стимулирующий эффект на стромальные и паренхиматозные элементы сопровождается усилением портальной гемодинамики, расширением синусоидных капилляров, купферовые клетки увеличены, имеют звездчатый вид и нередко превращаются в свободные макрофаги. Установлено адаптивное увеличение количества двоядерних клеток. Количество темных" и „светлых клеток" в течение эксперимента варьирует. В органе происходит физиологическая перестройка с регенерационными процессами без увеличения массы печеночных клеток и признаков ее повреждения. Структурные элементы тимуса переживают функциональное напряжение, которое проявляется в виде утолщения соединительнотканной капсулы, увеличении количества сосудов в перегородках между дольками, в корковом веществе увеличено количество митозов клеток, макрофагов. Эпителиоретикулярные клетки при этом имеют вид светлых, со светлым ядром и большим ядрышком клеток. В мозговом вешестве увеличивается количество телец Гассаля, что также свидетельствует об активных процессах метаболизма. Структурные элементы селезенки реагируют утолщением капсулы за счет увеличения коллагеновых и эластичных волокон. Выявлена выраженная реакция паренхимы селезенки, которая характеризуется изменениями в соотношении красной и белой пульпы, отмечается увеличение белой пульпы за счет относительного уменьшения красной. Установлено увеличение количества лимфатических фолликулов белой пульпы, что связано с реакцией органа на введение аллогенной ткани, в результате чего усиливается выработка лимфоцитов, а также незрелых и зрелых плазматических клеток. В надпочечниках отмечается гипертрофия клубочковой зоны, теряется четкость ее границ с пучковой зоной. Эта зона может значительно расширяться за счет периферических и более глубоко лежащих слоев. Клетки клубочковой зоны по своим размерам и виду становятся похожими на светлые большие клетки пучковой зоны. В яичнике отмечается увеличение количества первичных фолликулов. Во вторичных фолликулах стенка представлена 3-5 слоями клеток, которые окружают полость с фолликулярной жидкостью, выявляются третичные фолликулы. Ядра овоцитов первого порядка большие и светлые, нити хроматина тонкие и дисперсные. При экспериментальном воспалении применение экстракта плаценты позволяет в более короткие сроки нормализовать клеточные реакции в очаге воспаления и состояние периферической крови, что проявляется в достоверном угнетении нейтрофильной и усилении макрофагально-фибробластической реакции. То есть, противовоспалительный эффект экстракта проявляется в ограничении альтеративных и усилении репаративных явлений.

The dissertation is devoted to the influence of hypothermia and low temperatures upon placental tissue and the influence of placenta transplantation upon the morphofunctiogeny of some internals. The optimal technologies of placenta cryopreserving and placenta long-term storage have been worked out. First it has been found out that subcutaneous transplantation of both native and crvopreserved placenta is accompanied with strongly pronounced stimulative effect upon the different organs and systems that is explained by a presence in placental tissue of great number of fetal albumins and bioactive agents. The experiments on animals showed when transplanting of cryopreserved placenta the reactions of regenerative type were more marked but shorter in time interval on the exposure of reactions then in the group of animals undergone the transplantation of native placenta, though in both cases they were within the limits of physiological regeneration. The complex comparative research of some indices o f peripheral blood as well as morphological alterations in inflammatory locus in animals having experimental aseptic inflammation under transplantation of placental bioactive agents has been carried out and the expedience of their application has been experimentally proved.