Аналіз складу імунокомпетентних клітин термінальних бронхіол при хронічних обструктивних захворюваннях легень

Abstract

Було проведено аналіз клітинного інфільтрату власної пластинки термінальних бронхіол з вико- ристанням імуногістохімічного аналізу у хворих на ХОЗЛ. У дослідження було включено 10 пацієнтів з ХОЗЛ, у яких виконувалась секторальна резекція з приводу бульозної емфіземи. Групу контролю склали 6 пацієнтів, у яких не було ХОЗЛ або інших захворювань легень. Гістологічні зразки були отримані з обох груп. Імуногістохімічні дослідження проводили з використанням первинних моноклональних антитіл миші по загально прийнятій методиці. Усі отримані результати досліджень були піддані статистичній обробці для параметричних та непараметричних критеріїв з використанням програми «Minitab». Результати дослідження встановили, що при ХОЗЛ спостерігається достовірне збільшення (р<0,001) інфільтрації власної пластинки термінальних бронхів в порівнянні з контролем за рахунок загальних Т-лімфоцитів (CD3+), Т-хелперів (CD4+) та цитотоксичних Т-лімфоцитів (CD8+).

Целью работы явился анализ клеточного инфильтрата собственной пластины терминальных бронхиол у больных хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) при использовании иммуногистохимического анализа (ИГХ). В исследование было включено 10 пациентов с ХОБЛ, у которых проводилась секторная резекция по поводу буллезной эмфиземы. Группу контроля составили 6 пациентов, у которых не было ХОБЛ и другой патологии легких. Гистологические образцы были получены от двух групп. Иммуногистологические исследования проводились с использованием первичных моноклональных антител мыши по общепринятой методике. Все полученные результаты были подвергнуты статистической обработке для параметрических и непараметрических критериев с использованием программы «Minitab». Результаты исследования показали, что при ХОБЛ достоверно увеличивается (р <0,001) инфильтрация собственной пластинки терминальных бронхиол по сравнению с контролем за счет общих Т-лимфоцитов (CD3 +), Т-хелперов (CD4 +) и цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+).

Objective: analyse the immunocompentent cell composition of terminal bronchioles in patients with chronic obstructive pulmonary diseases (COPD). Methods and materials. Histological samples originated from 10 patients who had been operated on in Kiev municipal hospital №17 on account of bullous emphysema. The research included ten patients with COPD, whereas the control group consisted of 6 patients who did not have COPD. Lung tissue samples were taken from both groups and submitted for sector-based cross section analysis. Lung tissue was placed into 10% neutral-buffered formalin for 18-24 hours. After that, tissue pieces were extracted. 3 slices 3-5 mm long were obtained by cross section of the lung tissue. The samples were dehydrated using ethanol solutions of different concentrations and dipped in paraffin wax. Serial cross-section samples 4 mkm in width were produced using a rotatary microtome (Leica RM 2125 RT, Germany). The samples were placed on slides and colored using hematoxylin and eosinum (Merck, Germany) and on the SuperFrost Plus adhesive slides for further immunohistological research. Immunohistochemical (IHC) studies were performed by using primary monoclonal antibodies of mouse to Ki-67 (proliferation index), CD3, CD4, CD8, CD20, CD45, CD45R0 and CD68 (DAKO, Denmark) and EnVision + System-HRP imaging systems (DAB). The data obtained in the experiment was statistically processed using “Minitab 16” statistical software. Results and their discussion. The results of the study have shown that in COPD there was a significant increased (p <0.001) of infiltration of the terminal bronchioles compared to control by common T-lymphocytes (CD3 +), T-helpers (CD4 +) and cytotoxic T-lymphocytes (CD8 +) content. At the local level the immune response during COPD does not depend on migration of macrophages (CD68 +), B-lymphocytes (CD20 +), CD45 + cells, CD45RO + cells and Ki67 + cells into the inflammation area. This was found to be true for both the COPD and the control groups. At the systemic level, peripheral blood of COPD patients during exacerbation contained increased levels of T-lymphocytes (CD8+). At the same time, the level of cytotoxic T-lymphocytes (CD8+) type I increased, whereas level of cytotoxic T-lymphocytes (CD8+) type II decreased during the stable stage of the disease. A different author has noted that CD4+ и CD8+ levels in the peripheral blood decreased, which was justified by their migration into the areas of inflammation in the bronchi. Another research conducted by Eapen M.S. et al. (2017) has shown results somewhat similar to ours. Notably, the levels of T-lymphocytes (CD8+) in COPD patients were statistically higher than in the control group (P < 0.01). However, concentrations of macrophages and CD4+ T-lymphocytes did not differ statistically. Significance of the research. The importance of the application of this data based both on quantitative and qualitative characteristics of the local response of CD4+ and CD8+ T - lymphocyte subpopulations is undeniable. These subpopulations determine the course that the disease will take in COPD patients and aid in developing the most efficient and specific immune therapy. The author is convinced that individual approach to treatment of COPD patients is vital.