Спосіб кількісного визначення концентрації пероксинітриту в гомогенаті м’яких тканин

Abstract

Спосіб кількісного визначення концентрації пероксинітриту в гомогенаті м'яких тканин, що включає визначення концентрації атомарного йоду, що утворюється в реакції пероксинітриту та йодиду калію в присутності фосфатного буферного розчину із рН=7,0, який відрізняється тим, що для аналізу беруть 0,1 мл 10 % гомогенату тканин, загальний робочий об'єм зменшується до 5 мл, використовують кювету із довжиною оптичного шляху 10 мм, концентрацію пероксинітриту обчислюють за формулою: С=20·А, де С - концентрація пероксинітриту мкмоль/г, А - адсорбція проби на довжині хвилі 355 нм, 20 - коефіцієнт пропорційності, що враховує розведення проби під час аналізу, довжину оптичного шляху, коефіцієнт молярної екстинкції йоду при довжині хвилі 355 нм, вагу проби; для визначення швидкості та джерел продукції пероксинітриту використовують 5 хв. інкубація при t=37 °C та індуктори у вигляді: 0,1 мл буферного розчину (в 1 л дистильованої води розчинити 5,37 г безводного однозаміщеного фосфату калію, 8,5 хлориду натрію та 1,5 г гідроксиду натрію), 0,1 мл 3 % розчину НАДН, 0,1 мл 3 % розчину НАДФН, 0,1 мл розчину "Пірогенал".